熒光分光光度計(jì)的基本原理、功能用途與分類
熒光分光光度計(jì)的基本原理
高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫色光通過(guò)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)射熒光。熒光經(jīng)過(guò)過(guò)濾和反射后，由光電倍增管接受，然后以圖形或數(shù)字的形式顯示出來(lái)。物質(zhì)的熒光是正常條件下基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)而產(chǎn)生的。這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，在返回基態(tài)的過(guò)程中，一部分能量又以光的形式返回。發(fā)射，產(chǎn)生熒光。
由于不同物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)不同，其激發(fā)態(tài)能級(jí)分布具有不同的特點(diǎn)。這種特性體現(xiàn)在各種物質(zhì)都有自己的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的熒光上。因此熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的差異可用于定性識(shí)別物質(zhì)。
在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí)，熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度通常與該物質(zhì)的濃度具有良好的比例關(guān)系，即IF=KC。利用這種關(guān)系，可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析。與可見(jiàn)分光光度法類似，熒光分析通常使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。
熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)
1、光源：
高壓汞燈或氙弧燈，后者能發(fā)出高強(qiáng)度的連續(xù)光譜，在300nm～400nm范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等，所以比較常用。
2、激發(fā)單色儀：
放置在光源和樣品室之間的激發(fā)單色器或單色器用于濾除特定的激發(fā)光譜。
3、發(fā)射單色器：
置于樣品室和檢測(cè)器之間的是發(fā)射單色儀或第二單色儀，光柵通常用作單色儀。過(guò)濾掉特定的發(fā)射光譜。
4. 樣品室：
它通常由石英池（用于液體樣品）或固體樣品架（用于粉末或薄片樣品）組成。測(cè)量液體時(shí)，光源與檢測(cè)器成直角布置；測(cè)量固體時(shí)，光源與檢測(cè)器呈銳角排列。
5、探測(cè)器：
通常，光電管或光電倍增管用作檢測(cè)器。光信號(hào)可以被放大并轉(zhuǎn)換成電信號(hào)。
熒光分光光度計(jì)的功能特點(diǎn)
1. 熒光發(fā)射光譜
選擇實(shí)體樣品被一定波長(zhǎng)的光激發(fā)，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)的函數(shù)關(guān)系，即得到熒光發(fā)射光譜。
2. 熒光激發(fā)光譜
選擇一定的熒光發(fā)射波長(zhǎng)，記錄熒光發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)光波長(zhǎng)的函數(shù)，得到熒光激發(fā)光譜。
3.時(shí)間分辨技術(shù)；
它可用于區(qū)分和測(cè)量混合物中光譜重疊但壽命不同的成分。
時(shí)間分辨熒光測(cè)定公式如下：
P(t) = P0 EXP (-t /τ)
其中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)
P0：強(qiáng)度值
EXP：指數(shù)運(yùn)算符
t : 時(shí)間值
τ：熒光平均壽命
熒光分光光度計(jì)產(chǎn)品應(yīng)用
分析光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或化學(xué)處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，可用于生物化學(xué)、生物醫(yī)藥、環(huán)境化學(xué)等部門(mén)。
熒光分光光度計(jì)的分類
熒光光譜具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、樣品體積小、方法簡(jiǎn)單、工作曲線范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。可廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無(wú)機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。
熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手動(dòng)控制熒光分光光度計(jì)、自動(dòng)記錄熒光分光光度計(jì)和計(jì)算機(jī)控制熒光分光光度計(jì)三個(gè)階段。
分光光度計(jì)；熒光分光光度計(jì)還可以分為單光束熒光分光光度計(jì)和雙光束熒光分光光度計(jì)兩大系列。
經(jīng)過(guò)以上一步一步的分析和闡述，我們就不難理解熒光分光光度計(jì)的工作原理了。最后，我想提一點(diǎn)小意見(jiàn)。一開(kāi)始，我們實(shí)驗(yàn)室使用的是奧林巴斯熒光分光光度計(jì)。
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